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潮霉素B Hygromycin B穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

  潮霉素B Hygromycin B穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

  1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

  注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。

  2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

  3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

  4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

  5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

  潮霉素B Hygromycin B時(shí)的注意事項(xiàng)

  1) 潮霉素B Hygromycin B的抗性基因(hyg或hph)除了來(lái)自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

  2) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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