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技術(shù)文章
了解一下去垢劑在蛋白提取中的應(yīng)用吧
  去垢劑亦有稱為清潔劑,主要成分是表面活性劑(部分場(chǎng)合即特指表面活性劑,可分陰離子、陽離子和中性去垢劑等多種類型,中性去垢劑在蛋白提取中應(yīng)用的較多),根據(jù)實(shí)際需求有時(shí)也會(huì)包括研磨劑,pH調(diào)節(jié)劑,酸,硬水軟化劑,氧化劑,酶,發(fā)泡劑,增白劑、稀釋劑等多種成分。
 
  下面讓我們了解一下去垢劑在蛋白提取中的應(yīng)用吧
 
  蛋白質(zhì)變性劑的作用是破壞蛋白質(zhì)的次級(jí)鍵,如氫鍵、鹽鍵和疏水力,引起天然構(gòu)象的解體;它們并不破壞共價(jià)鍵,如肽鍵和二硫鍵,故不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。
 
  變性劑有溶解型和沉淀型兩類,SDS、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑,而甲醇、異戊醇是有效的沉淀變性劑。
 
  一般而言,變性劑應(yīng)用時(shí)常大大過量,破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍于氨基酸的克分子數(shù),如1克蛋白質(zhì)可可結(jié)合1.4g。
 
  SDS溶于水可達(dá)25%,對(duì)溫度敏感,W/V貯存液為方便。需要注意的是SDS的鉀鹽是不溶性的,所以SDS溶液中要避免混入鉀鹽。
 
  尿素極易溶于水,可達(dá)10mol/L,在8mol/L以上要注意溫度以防止沉淀。尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子,故要防止高溫。 過氯酸(TCA,PCA)都是*的沉淀劑,能沉淀蛋白質(zhì)和核酸,前者應(yīng)用更為廣泛。
 
  去垢劑作為添加劑生長(zhǎng)蛋白質(zhì)晶體是一項(xiàng)很有用的技術(shù)。非離子和兩性離子結(jié)晶劑在膜蛋白結(jié)晶中已經(jīng)得到很好應(yīng)用,目前已經(jīng)變成常規(guī)的實(shí)驗(yàn)手段。
 
  去垢劑在一些可溶蛋白中也起到了一定的作用,提高了晶體的質(zhì)量和結(jié)果的可重復(fù)性 ,促進(jìn)了單晶的生長(zhǎng), 但具體的影響機(jī)制尚不明確。其可能原因是去垢劑的引入使結(jié)晶液滴中的蛋白分子更具有親水性,使溶液中同質(zhì)蛋白質(zhì)分子增加。
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